Hippocampal neurons 3 pussel

Fördelning av hippocampal neurons som uttrycker EGFP från tillskyndaren Nr4a1/Nur77 (Tg (Nr4a1-EGFP) GY139Gsat, www.gensat.org) i hippocampal CA1 colabelled för den vesicular glutamattransporteren (VGluT1, rött, polyclonal Invitrogen, 1:1000) och befläckt med DAPI (blått) för att visa celllagrar. EGFP-uttryckt förstärktes med fegt anti-GFP (Abcam, 1:2000). VGluT1 märker excitatory terminaler som synapsing i det molekylära lagrar av den dentate gyrusen, orien mossy fiberterminaler i CA3 och dendritic fält av de pyramidal cellerna i stratum och stratumradiatum. Nr4a1-EGFP uttrycks tungt av pyramidal celler CA1 och till en lesser grad i pyramidal celler CA3 med glesa celler i den dentate gyrusen (se tillhörande bilder). Dela upp (40 um, pilformigt) monterades med Fluoromount G och avbildades med en 5X, 0,15 NA-mål på ett Zeiss Axiovert mikroskop. AF568 var upphetsad på 562/40 nm, och utsläpp som samlas på 624/40 nm med Semrock, filtrerar och ett dichroic singelmusikband (reflekterad 530-585 nm, överförd 601-800 nm). AF488 var upphetsad på 482/35 nm, och utsläpp som samlas på 536/40 nm med Semrock, filtrerar och ett dichroic singelmusikband (reflekterad 446-499 nm, överförd 513-735 nm). DAPI var upphetsad på 350/50 nm och utsläpp som samlades på 460/50 nm med en dichroic CLP400 (Chroma). Singelbilder fångades för varje kanaliserar genom att använda en Zeiss Axiocam HERR CCD och pseudo-färgat genom att använda Axiovision. Linjär bakgrundssubtraktion användes på framlagd avbildar. Se Davis och Puhl (2011), Pubmed legitimation 21305052, for ett specificerat befläckaprotokoll och bilder av EGFP-uttryckt i striatumen och amygdalaen i denna anstränger. Detta avbildar är delen av en serie som karakteriserar EGFP-uttryck från alltigenom för tillskyndaren Nr4a1 hjärnan.